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保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定

发布时间:2025/8/419

保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
(本法参照GB/T5009·171-2003
 
一、原理
25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。在碱性条件下,邻苯三酚会发生自氧化,可根据SOD抑制邻苯三酚自氧化能力测定SOD活力。
二、试剂
1A液:PH8.200.1mol/l三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(内含1mmol/LEDTA·2Na)。称取1.2114g三羟甲基氨基甲烷和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4ml0.1mol/l盐酸溶液中,用蒸馏水定溶*100ml
2B液:4.5mmol/l邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚56.7mg溶于少量10mmol/l盐酸溶液,并定容*100ml
3、盐酸溶液:10mmol/l
4、蒸馏水:二重石英蒸馏水。
三、仪器
1、紫外-可见分光光度计;
2、精密酸度计,0.01PH
3、离心机;
410ml比色管;
510ml离心管;
6、玻璃乳钵。
四、测定步骤
1、取茶叶样品1.00g置于研钵中,加入9.0ml蒸馏水研磨5分钟,移入10ml离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵,洗液并入离心管中,加蒸馏水*刻度,经4000r/min离心15分钟,取上清液测定。
2、在25℃左右,于10ml比色管中依次加入A2.35ml,蒸馏水2.00mlB0.15ml。加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1Min后吸光度值,二者之差为邻苯三酚自氧化速率△A325min-1)为0.060
3、在25℃左右,于10ml比色管中依次加入20.0ul样液或酶液,A2.35ml,蒸馏水2.00mlB0.15ml。加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1分钟后吸光度值,二者之差为样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率△A325min-1)。加入样液或酶液的量使抑制邻苯三酚自氧化速率为1/2A325min-1),即0.030
五、计算结果
               
SOD活力(u/g                          
                        
式中:
V—加入样液或酶液的体积,ml
A325邻苯三酚自氧化速率
A325样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率
D—样液或酶液的稀释倍数
V1样液总体积,ml
4.5—反应液总体积,ml
m—样液的质量,ml
 
 

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